復(fù)方地龍膠囊對哮喘小鼠血清il-13的作用

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1、復(fù)方地龍膠囊對哮喘小鼠血清IL-13的作用崔素華1、2丁伯平1黃維琳2唐國華3(1皖南醫(yī)學(xué)院藥理教研室安徽蕪湖241000)(2安徽中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校安徽蕪湖241000)(3蕪湖市第一人民醫(yī)院安徽蕪湖241000)【摘要】目的探討復(fù)方地龍膠囊對哮喘小鼠血清白細(xì)胞介素-13CIL-13)的作用，從分子水平研究其治療哮喘的可能機(jī)制。方法釆用卵白蛋白腹腔注射致敏建立小鼠支氣管哮喘模型，用復(fù)方地龍膠囊、地塞米松與牛理鹽水對小鼠進(jìn)行干預(yù)，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測小鼠血清白細(xì)胞介素(IL-13)的

2、表達(dá)水平。結(jié)果哮喘模型組小鼠血清ILJ3含量顯著高于正常對照組(P<0.01);復(fù)方地龍膠囊各劑量組及地塞米松組ILJ3含量水平均明顯低于哮喘模型組(P<0.05)；復(fù)方地龍膠囊各劑量組與地塞米松組比較，差異不顯著(P>0.05)o結(jié)論復(fù)方地龍膠囊可能通過影響哮喘小鼠血清IL-13的水平，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)產(chǎn)牛治療作用?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方地龍膠囊哮喘IL-13支氣管哮喘是由多種細(xì)胞包括氣道的炎性細(xì)胞和結(jié)構(gòu)細(xì)胞(如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)

3、胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾?。?］。流行病學(xué)研究表明，哮喘的發(fā)病率和病死率具有全球性上升的趨勢［2］。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，全球大約有3億哮喘患者。防治哮喘己成為全球公共衛(wèi)牛問題。哮喘的主要特征是氣道嗜酸性粒細(xì)胞浸潤、支氣管痙攣和氣道高反應(yīng)。免疫反應(yīng)在哮喘的發(fā)病機(jī)制中占有重要地位。根據(jù)細(xì)胞因子分泌及效應(yīng)功能的不同，抗原特異性CD4+T細(xì)胞分為1型輔助性T淋巴細(xì)胞(Thl)和2型輔助性T淋巴細(xì)胞(Th2)兩類。現(xiàn)研究認(rèn)為哮喘發(fā)病的重要基礎(chǔ)是Thl/Th2細(xì)胞類細(xì)胞因子比例和功能失衡［3］。Thl和T

4、h2細(xì)胞之間處于相互抑制狀態(tài)，兩者形成復(fù)雜有序的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)正常的免疫應(yīng)答。正常情況下，兩者處于一種平衡狀態(tài)。Th細(xì)胞中的Thl/Th2平衡失調(diào)，Th2細(xì)胞數(shù)目增多及功能亢進(jìn)是哮喘發(fā)病的重要基礎(chǔ)之一［4］。哮喘時(shí)浸潤至氣道的主要為Th2細(xì)胞,Thl細(xì)胞相對較少；由Th2細(xì)胞所產(chǎn)生的Th2類細(xì)胞因子IL?5、IL-13等在哮喘氣道表達(dá)的mRNA及蛋白水平均過度增高;ThI類細(xì)胞因子如IFN-r相對不足oIFN-r和IL?5、IL-13分別是ThI和Th2免疫反應(yīng)的代表性細(xì)胞因子，體現(xiàn)著ThI和

5、Th2細(xì)胞的主要生物學(xué)效應(yīng)。"2類細(xì)胞因子11_?5、IL-13等產(chǎn)生增多，而Thl類細(xì)胞因子IFN?r等產(chǎn)生減少，從而導(dǎo)致B細(xì)胞合成增多、嗜酸性粒細(xì)胞活化浸潤氣道及氣道高反應(yīng)性。因此調(diào)節(jié)Thl/Th2平衡對哮喘的治療具有重要意義，促進(jìn)ThO細(xì)胞向ThI細(xì)胞分化，抑制Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)Thl/Th2的反應(yīng)失衡可能用于防治哮喘。由于Th2細(xì)胞因子在哮喘等過敏性炎癥的發(fā)生發(fā)展中起的重要作用，以此為靶點(diǎn)的研究是目前哮喘治療研究中的熱點(diǎn)［5-8］o1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)對象48只清潔級健康小鼠，

6、體重30±2g,雌雄各半，購自南京青龍山實(shí)驗(yàn)動物中心。1.2主要儀器全自動電子霧化器（南京道芬電子儀器廠），80?2型離心機(jī)（上海手術(shù)機(jī)械廠），微量移液器（上海求精玻璃儀器廠），電熱恒溫水箱（上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠），酶標(biāo)儀（美國Costar公司）。1.3主要試劑卵白蛋白（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）、復(fù)方地龍膠囊（南京恒生制藥廠,批號:Z199991007）＞小鼠白細(xì)胞介素13定量檢測試劑盒（ELISA）（深圳晶美生物公司）。1.4動物分組48只小鼠隨機(jī)分為6組，每組8只。A組為空白

7、對照組，B組為哮喘模型組，C組為復(fù)方地龍膠囊高劑量組（0.9mg/g/d）,D組為復(fù)方地龍膠囊中劑量組（0.6mg/g/d）,E組為復(fù)方地龍膠囊低劑量組（0.3mg/g/d）,F組為地塞米松激素治療組（1.5mg/kg/d）o1.5建立模型采用雞卵清蛋白(OVA)腹腔注射及霧化吸入方法制造小鼠哮喘模型。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，空白對照組以生理鹽水致敏和引喘，其余各組于dl、8天分別腹腔注射含10%OVA100ug.明磯2mg混懸液0.3ml致敏，兩周后小鼠逐個(gè)放入體積約5L的透明密閉容器中，霧化吸入1

8、%OVA(200mgOVA溶于生理鹽水20ml)20分鐘，連續(xù)7天，小鼠出現(xiàn)明顯腹肌收縮、鼻部潮濕、噴嚏、紫纟甘、煩躁、激惹等呼吸道癥狀，證明激發(fā)成功。1.6治療方法空白對照組、哮喘模型組在每次激發(fā)前l(fā)h以生理鹽水灌胃，地塞米松組在每次激發(fā)前l(fā)h腹腔注射1.5mg/kg地塞米松注射液，復(fù)方地龍膠囊高、中、低劑量組在每次激發(fā)前l(fā)h分別予小鼠復(fù)方地龍膠囊0.9mg/g>0.6mg/g、0.3mg/g灌胃。1.7標(biāo)本獲取全部動物于末次激發(fā)后lh,眼眶動脈取血牛5ml。所取血液在4°C,4