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1、鴨源呼腸孤病毒的分離與鑒定摘要禽呼腸孤病毒感染在多種鳥類體內(nèi)普遍存在，能引起雞、番鴨、鴨感染疾病，而且，禽呼腸孤病毒的感染流行日益加劇，臨床疾病形式不斷多樣化，這些給各國禽養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。2006年以來湖北省一些肉鴨場均出現(xiàn)一種以脾臟有大量白色壞死斑塊為特征的急性傳染病，患病率為100％，死亡率達(dá)40％。本研究通過自然發(fā)病鴨流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病毒分離純化、理化特性、血清中和試驗、動物回歸試驗和分子生物學(xué)方法證明該病病原為呼腸孤病毒科正呼腸孤病毒屬鴨源禽呼腸孤病毒。本研究觀察記錄了自然感染鴨的臨床癥狀和病理學(xué)變化。
2、病鴨臨床表現(xiàn)為腹瀉，流淚，生長緩慢，剖檢可見脾臟表面分布著白色或黃白色，大小不一的圓形病灶，肝臟腫大，表面呈白色網(wǎng)格狀。病理組織學(xué)檢查顯示，脾臟內(nèi)可見多個壞死灶，灶內(nèi)細(xì)胞壞死，壞死灶周圍結(jié)締組織增生，有大量吞噬含鐵血黃素的巨噬細(xì)胞。肝細(xì)胞變性，細(xì)胞核消失溶解。對病鴨脾臟的透射電鏡觀察結(jié)果顯示，脾臟內(nèi)有大量嗜酸性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。取病鴨的肝、脾組織，經(jīng)尿囊腔接種櫻桃谷鴨胚后，分離到一株病毒，該病毒的鴨胚半數(shù)致死量ELD50為10弓·75，0．2ml。此外，該病毒能引起鴨胚成纖維細(xì)胞病變，半數(shù)感染量TCID50為104～，O．1ml
3、。經(jīng)鴨胚中和試驗顯示，該株病毒能被禽呼腸孤病毒陽性血清所中和。該病毒病原特性、理化特性和致病性檢測結(jié)果顯示，病毒呈圓形，直徑約為70nm，無囊膜，雙層衣殼結(jié)構(gòu)。對乙醚不敏感，對熱有抵抗力，經(jīng)65℃lh處理，病毒活性沒有降低，對PH3酸性環(huán)境有抵抗力，對雞紅細(xì)胞沒有血凝性。根據(jù)番鴨呼腸孤病毒S2基因設(shè)計引物，通過RT-PCR方法，測定了該病毒的S2基因序列，全長為1123bp，與鴨源呼腸孤病毒同源性為97％，與番鴨呼腸孤病毒同源性為93％。上述結(jié)果表明，引起以脾壞死為主要特征的鴨傳染病病原是呼腸孤病毒科正呼腸孤病毒屬禽呼腸孤病毒。
4、關(guān)鍵詞：禽呼腸孤病毒；分離與鑒定；血清中和試驗；電鏡負(fù)染；RT-PCR華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2009屆碩士學(xué)位論文AbstractAvianreovlrusexistsinmanykindsofbirds．Chickens、Muscovyducksandducksinfectedbyavianreoviruswouldbewithdisease．While，diseaseinducedbyavianreoviruswasdiversificationandanabatic．Soeconomiclosscasedbyavianreoviru
5、s，aredamagingaviancultura．1industryinmanycountry．In2006，therehadbeenanewacuteinfectiousdiseaseinsomeducknurseriesinHubeiprovince．Thereweremanywhitenecroticlesionsonthespleenofduckinfected．Morbidityratewas100％andmortalityratewas40％．Throughserumneutralizationtest，RT-PC
6、RandSOon，thisresearchcertifiedthatpathogenwasavianreovirus．Clinicalsymptomandpathologicalchangewereobserved．Infectedduckshadphenomenonofdiarrheaanddacryorrhea．Afterdissectingdeadducks，thereweremanywhiteplaquesinthesurfaceofspleenofdeadduck．Andliverbecamewhiteandretic
7、ulate．Theresultofhistopathologicexaminationwasasbelow：Thereweresomefocusesofnecrosisinspleen．Cellularnecrosistookplaceinthefocuses．Andheterophilegranulocytesinfiltratedinthefocusofthespleen．Nucleolusofhepatocytebecamedisappeared．Thereweremanyeosinophilegranulocytesan
8、dmacrophagesinthespleen，whichobservedbytransmissionelectronmicroscope．Whenduckembryowasinoculatedthroughallantoiccavity，onestrainof
