棗花丹合劑對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的實(shí)驗(yàn)研究論文

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1、棗花丹合劑對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的實(shí)驗(yàn)研究論文周永忠，趙迅霞，于賡賡，包佳敏，陳芳花，賀弋【摘要】目的探討棗花丹合劑對(duì)小鼠的鎮(zhèn)靜、催眠及抑制自主活動(dòng)的作用。方法采用自主活動(dòng)儀測定小鼠的活動(dòng)次數(shù)，翻正反射法測定注射戊巴比妥鈉后小鼠睡眠時(shí)間，對(duì)抗3-MP誘導(dǎo)驚厥實(shí)驗(yàn)來觀察棗花丹合劑對(duì)正常小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用。結(jié)果棗花丹合劑高、中、低劑量組均能增加入睡小鼠的動(dòng)物數(shù).freela公司。地西泮注射液(Diazepam，DZ)：上海旭東海普藥業(yè)有限公司。2方法2.1動(dòng)物分組將265只小鼠隨機(jī)分為5組：棗花丹合劑大劑量組(ZHD大劑量組)、棗花丹合劑中

2、劑量組(ZHD中劑量組)、棗花丹合劑小劑量組(ZHD小劑量組)。安定組、生理鹽水組。每組45只，各組又隨機(jī)分為A、B、C三個(gè)小組，每小組15只。依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)所測得ZHD最大耐受量為45g/kg，以45g/kg為高劑量組，再以稀釋至最大耐受量的1/2作為中劑量組,1/4作為低劑量組,將ZHD分為大、中、小劑量組，分別給予45，22.5，11.25g/kg·d棗花丹合劑灌胃。安定組按4mg/kg·d灌胃。生理鹽水組灌服與其它組等容積生理鹽水，各組連續(xù)給藥7d，2次/d，于末次給藥前8h禁食，前1h禁水，于末次給藥30min后開始記錄小鼠睡

3、眠時(shí)間、自主活動(dòng)等指標(biāo)。小鼠每次灌胃劑量為：0.4ml/20g。2.2觀察指標(biāo)2.2.1小鼠自主活動(dòng)次數(shù)小鼠連續(xù)灌胃7d,于末次給藥30min后將各不同劑量組中A小組15只小鼠置于ZYC-1型自主活動(dòng)儀內(nèi)(每臺(tái)同時(shí)觀測5只小鼠),測小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)，實(shí)驗(yàn)要求在安靜、光線較暗的環(huán)境中檢測。小鼠適應(yīng)環(huán)境5min，計(jì)數(shù)10min內(nèi)小鼠的的活動(dòng)次數(shù)，并進(jìn)行各組對(duì)比。2.2.2小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量協(xié)同實(shí)驗(yàn)對(duì)ZHD高中低不同劑量組的B小組小鼠分別灌胃45，22.5和11.25g/kg的，30min后給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉20mg/kg，觀

4、察20min內(nèi)小鼠翻正反射消失1min以上的動(dòng)物數(shù)并計(jì)算睡眠小鼠百分率。2.2.3戊巴比妥鈉的小鼠的潛伏期及睡眠時(shí)間給所有的B組小鼠灌胃給藥，30min后給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg，觀察睡眠小鼠數(shù)以計(jì)算睡眠小鼠百分率，并記錄入睡小鼠的睡眠時(shí)間(翻正反射消失到恢復(fù)的時(shí)間為睡眠時(shí)間。翻正反射消失達(dá)1min以上者確定為陽性，即已入睡)。2.2.4小鼠抗驚厥實(shí)驗(yàn)對(duì)各不同劑量組的C小組小鼠連續(xù)給藥7d,于末次給藥30min后腹腔注射20μl/kg劑量的3-MP，觀察有無驚厥現(xiàn)象的發(fā)生，計(jì)算其驚厥的發(fā)生率，以證實(shí)棗花丹合劑無鎮(zhèn)靜作用

5、。2.2.5數(shù)據(jù)處理所得數(shù)據(jù)均用±s表示。用SPSS10.0軟件單因素方差分析，方差不齊時(shí)用非參數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。3結(jié)果3.1對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響結(jié)果見表1。表1ZHD對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響3.2對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉催眠作用的影響結(jié)果見表2。表2對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉催眠作用的影響由表2可以看出與陰性對(duì)照組比較，ZHD水提高劑量組可明顯增加戊巴比妥鈉最大閾下劑量所致的小鼠入睡的只數(shù)，表明ZHD合劑與戊巴比妥鈉具有協(xié)同作用且有一定的劑量依賴關(guān)系。3.3對(duì)注射閾劑量戊巴比妥鈉的小鼠睡眠時(shí)間的影響結(jié)果見表3。表3對(duì)戊巴比妥鈉閾劑量睡眠時(shí)

6、間的影響由表2可以看出與陰性對(duì)照組比較，ZHD高劑量組可顯著延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間(P0.01)，同時(shí)可縮短睡眠潛伏期時(shí)間(P0.05)。此外，與安定組相比高劑量組與安定組無顯著性差別(P0.05)，表明ZHD高劑量組的鎮(zhèn)靜催眠作用與安定0.004g/kg時(shí)作用相當(dāng)。3.4對(duì)注射3-MP后小鼠驚厥程度影響結(jié)果見表4。表4抗驚厥試驗(yàn)結(jié)果從表4可以看出，與陰性對(duì)照組(生理鹽水組)相比(P0.01),.freelmell等10用GABAA2α受體激動(dòng)劑CGS21680興奮vLPO神經(jīng)元時(shí)則睡眠時(shí)間增加，上述不同的實(shí)驗(yàn)證據(jù)均證明了vLPO是

7、機(jī)體睡眠發(fā)生的重要部位。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明vLPO中80%的神經(jīng)元含有抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸(GABA)和galanin，它們發(fā)出纖維投射到下丘腦后部的結(jié)節(jié)乳頭體核(TMN)、腦干縫核、藍(lán)斑核等覺醒中樞產(chǎn)生抑制覺醒作用11。GABA受體激動(dòng)劑GABA和GABAB受體激動(dòng)劑BAC可延長睡眠時(shí)間而縮短覺醒時(shí)間11。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)ZHD能夠延長小睡眠時(shí)間而縮短小鼠覺醒時(shí)間，由此推測：ZHD可能會(huì)激活vLPO中的γ-氨基丁酸能神經(jīng)元活性，使GABA的分泌增多，從而誘發(fā)睡眠。3-MP為GABA合成酶的抑制劑，微量注射3-MP會(huì)減少內(nèi)源性GAB

8、A的合成和釋放，對(duì)覺醒中樞抑制減弱，導(dǎo)致覺醒中樞相對(duì)增強(qiáng)12，13。本實(shí)驗(yàn)在對(duì)小鼠灌胃7d，于末次給藥30min后腹腔注射一定濃度的3-MP，小鼠末見驚厥現(xiàn)象的發(fā)生，提示ZHD具有對(duì)抗3-MP的作用，說明ZHD能增強(qiáng)內(nèi)源性GABA的合